实验室新手指南之DNA&RNA提取

 DNA 提取

1. 取材料，加液氮研磨成粉末状，迅速移入 1.5 ml Eppendorf 管中;
2. 加入 800 μl 的 CTAB 提取缓冲液，混匀(CTAB 在 65℃水浴预热)，每5min轻轻震荡几次，20min后12000 r/min，离心15 min;
3. 小心吸取上清液，加入等体积的酚：氯fang(各 400μl)溶液，混匀，4℃，12000 r/min，离心 10 min;
4. 小心吸取上清液，加入等体积的氯fang，混匀，4℃，12000 r/min，离心 10 min；
5. 重复步骤(4)1-2 次，以蛋白层不出现为止;
6. 取上清，-20℃沉淀 1h，4℃，12000 r/min，离心 10 min;
7. 弃去上清液，用 70%乙醇洗涤沉淀 2 次;
8. 室温下干燥后(一般干燥 5-15 min)，溶于 30-50 μl DEPC 去离子水中，于-20℃或者-70℃下保存备用。

RNA 提取

样品处理：

1. 培养细胞：收获细胞 1-5×107，移入 1.5ml 离心管中，加入 1ml Trizol，混匀，室温静置 5min。
2. 组织：取 50-100mg 组织(新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可)置 1.5ml 离心管中，加入 1ml Trizol 充分匀浆，室温静置5min。

提取步骤：

1. 加入 0.2ml 氯fang，振荡 15s，静置 2min。
2. 4℃离心，12000g×15min，取上清。
3. 加入 0.5ml 异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置 10min。
4. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。
5. 加入 1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。
6. 晾干，加入适量的 DEPC H2O 溶解(65℃促溶 10-15min)。